zPDX-Analyse de l’invasivité : Étude du comportement invasif des cellules cancéreuses métastatiques chez les xénogreffes embryonnaires zebrafish

Les xénogreffes embryonnaires de poisson zèbre sont utiles pour étudier l’invasion des cellules cancéreuses. Préparer des modèles de xénogreffe en injectant des cellules cancéreuses métastatiques étiquetées fluorescentes et des cellules non cancéreuses dans l’espace périvitelline de deux embryons transgéniques. L’espace périvitelline est un espace entre l’embryon periderm et le sac jaune. Laisser pousser les embryons pendant la période désirée.

Pendant cette période, les cellules cancéreuses métastatiques se divisent agressivement dans le site d’injection tandis que les cellules non cancéreuses restent stables. Après l’incubation, utiliser une pipette pasteur pour transférer les embryons dans un plat de suspension de fond en verre. Enlevez l’excès d’eau des œufs et placez les embryons dans la position désirée pour l’imagerie. Gardez un slip de couverture sur le dessus du plat et placez le plat sous un microscope à champ lumineux.

Capturez des images et analysez le comportement invasif des deux types de cellules. Les cellules cancéreuses métastatiques ont tendance à envahir les vaisseaux sanguins à partir du site d’injection. Ils se déplacent le long de la circulation, puis envahissent le tissu environnant pour proliférer. En revanche, les cellules non cancéreuses restent sur le site d’injection. Dans le protocole d’exemple, nous injecterons des cellules cancéreuses du sein dans l’espace périvitelline et le conduit de Cuvier dans les modèles de xénogreffe de poisson zèbre pour étudier la métastase.

Pour visualiser la métastase, à l’aide d’une pipette pasteur, transférez l’embryon injecté de poisson zèbre dans un plat en polystyrène de fond de verre et enlevez l’excès d’eau d’œuf. Image de l’ensemble du corps de l’embryon avec un microscope confocal mis à faible grossissement pour obtenir un modèle général de diffusion des cellules tumorales.

Utilisez un laser de 488 nanomètres pour visualiser la vascularisation embryonzéfish et un laser de 543 nanomètres pour visualiser les cellules tumorales implantées étiquetées avec marqueur fluorescent rouge. Ensuite, numérisez l’embryon en huit à dix étapes pour acquérir une image de haute qualité.