Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
زيبرافيش جنين xenografts مفيدة في دراسة غزو الخلايا السرطانية. إعداد نماذج xenograft عن طريق حقن الخلايا السرطانية النقيلي المسمى الفلوري والخلايا غير السرطانية في الفضاء perivitelline من اثنين من الأجنة المعدلة وراثيا. الفضاء perivitelline هو الفضاء بين periderm الجنين وكيس صفار. دع الأجنة تنمو للفترة المطلوبة.
خلال هذه الفترة، تنقسم الخلايا السرطانية النقيلية بقوة في موقع الحقن بينما تبقى الخلايا غير السرطانية مستقرة. بعد الحضانة، استخدم ماصة باستور لنقل الأجنة إلى طبق تعليق زجاجي أسفل. قم بإزالة ماء البيض الزائد ووضع الأجنة في الوضع المطلوب للتصوير. الحفاظ على زلة غطاء على رأس الطبق ووضع الطبق تحت المجهر حقل مشرق.
التقاط الصور وتحليل السلوك الغازي لكلا النوعين من الخلايا. تميل الخلايا السرطانية النقيلية إلى غزو الأوعية الدموية من موقع الحقن. أنها تتحرك على طول الدورة الدموية، ومن ثم غزو في الأنسجة المحيطة بها لتتكاثر. وعلى النقيض من ذلك، تبقى الخلايا غير السرطانية في موقع الحقن. في بروتوكول المثال، سنقوم بحقن خلايا سرطان الثدي في الفضاء perivitelline والقناة من كوفييه في نماذج xenograft حمار وحشي لدراسة الانبثاث.
لتصور الانبثاث، مع ماصة المبستر، نقل جنين حمار وحشي حقن إلى طبق البوليسترين أسفل الزجاج وإزالة مياه البيض الزائدة. صورة الجسم كله من الجنين مع المجهر confocal تعيين إلى التكبير منخفضة للحصول على نمط عام لنشر الخلايا السرطانية.
استخدم ليزر 488 نانومتر لتصور الأوعية الدموية لجنين حمار وحشي وليزر 543 نانومتر لتصور الخلايا السرطانية المزروعة المسماة بعلامة الفلورسنت الحمراء. بعد ذلك ، قم بمسح الجنين في ثماني إلى عشر خطوات للحصول على صورة عالية الجودة.
