Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Zebrafish embryo xenografts er nyttige for å studere kreftcelleinvasjon. Forbered xenograftmodeller ved å injisere fluorescerende merket metastatiske kreftceller og ikke-kreftceller i perivitellinerommet til to transgene embryoer. Perivitellinerommet er et mellomrom mellom embryoperiderm og eggeplommesekken. La embryoer vokse i ønsket periode.
I løpet av denne perioden deler metastatiske kreftceller seg aggressivt på injeksjonsstedet, mens ikke-kreftceller forblir stabile. Etter inkubasjon, bruk en pasteurpipette for å overføre embryoer til en glassbunnsopphengsfat. Fjern overflødig eggvann og plasser embryoer i ønsket posisjon for avbildning. Hold et deksel på toppen av parabolen og legg parabolen under et lyst feltmikroskop.
Ta bilder og analyser den invasive oppførselen til begge typer celler. Metastatiske kreftceller har en tendens til å invadere blodkar fra injeksjonsstedet. De beveger seg langs sirkulasjonen, og invaderer deretter inn i det omkringliggende vevet for å spre seg. I motsetning forblir de ikke-kreftformige cellene på injeksjonsstedet. I eksempelprotokollen vil vi injisere brystkreftceller i perivitellinerommet og kanalen til Cuvier i sebrafisk xenograftmodeller for å studere metastase.
For å visualisere metastase, med en pasteurpipette, overfør det injiserte sebrafiskembryoet til en glassbunn polystyrenfat og fjern overflødig eggvann. Bilde hele kroppen av embryoet med et konfokalt mikroskop satt til lav forstørrelse for å oppnå et generelt mønster av tumorcelleformidling.
Bruk en 488 nanometerlaser for å visualisere sebrafisk embryovaskulaturen og en 543 nanometerlaser for å visualisere implanterte tumorceller merket med rød fluorescerende markør. Deretter skanner du embryoet i åtte til ti trinn for å få et bilde av høy kvalitet.
