zPDX-analyse af invasivitet: Undersøgelse invasiv adfærd metastatiske kræftceller i zebrafisk Embryo Xenografts

Zebrafisk embryo xenografts er nyttige i at studere kræft celle invasion. Forbered xenograft modeller ved at injicere fluorescerende mærket metastatiske kræftceller og ikke-kræftceller i perivitelline rummet af to transgene embryoner. Perivitelline rummet er et rum mellem embryoet periderm og æggeblomme sæk. Lad embryoner vokse i den ønskede periode.

I løbet af denne periode deler metastatiske kræftceller aggressivt i injektionsstedet, mens ikke-kræftceller forbliver stabile. Efter inkubation, bruge en pasteur pipette til at overføre embryoner i et glas bund suspension parabol. Fjern overskydende ægvand og placer embryoner i den ønskede position til billeddannelse. Hold et dækslet slip på toppen af fadet og placere skålen under et lyst felt mikroskop.

Tag billeder og analyser den invasive adfærd i begge typer celler. Metastatiske kræftceller har tendens til at invadere blodkarrene fra injektionsstedet. De bevæger sig langs cirkulationen, og derefter invadere ind i det omgivende væv til at formere sig. I modsætning hertil forbliver de ikke-kræftceller på injektionsstedet. I eksemplet protokol, vil vi injicere brystkræftceller i perivitelline plads og kanal Cuvier i zebrafisk xenograft modeller til at studere metastaser.

For at visualisere metastaser, med en pasteur pipette, overføre injiceres zebrafisk embryo til et glas bund polystyren parabol og fjerne overskydende æg vand. Billede hele kroppen af embryoet med en konfokal mikroskop indstillet til lav forstørrelse for at opnå et generelt mønster af tumor celle formidling.

Brug en 488 nanometer laser til at visualisere zebrafisk embryo vaskulatur og en 543 nanometer laser til at visualisere implanterede tumorceller mærket med rød fluorescerende markør. Scan derefter embryoet i otte til ti trin for at få et billede af høj kvalitet.