Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Ксенотрансплантаты эмбрионов зебры полезны при изучении вторжения раковых клеток. Подготовка ксенотрансплантатных моделей путем введения флуоресцентно помеченных метастатических раковых клеток и неракомовых клеток в перивителлин пространство двух трансгенных эмбрионов. Перивильлин пространство пространство между перидермом эмбриона и желточный мешок. Пусть эмбрионы растут в течение желаемого периода.
В течение этого периода метастатические раковые клетки агрессивно делятся в месте инъекции, в то время как не раковые клетки остаются стабильными. После инкубации используйте пастерную пипетку для переноса эмбрионов в стеклянную подвесную тарелку. Удалите избыток яичной воды и распоилите эмбрионы в нужном положении для визуализации. Держите крышку скольжения на верхней части блюда и поместите блюдо под ярким полевым микроскопом.
Захват изображений и анализ инвазивного поведения обоих типов клеток. Метастатические раковые клетки, как правило, вторгаются в кровеносные сосуды из места инъекции. Они движутся вдоль циркуляции, а затем вторгаются в окружающую ткань, чтобы размножаться. В отличие от этого, не раковые клетки остаются в месте инъекции. В примере протокола, мы будем вводить раковые клетки молочной железы в перивителлин пространстве и проток Кювье в зебрафиш ксенотрансплантата моделей для изучения метастазов.
Чтобы визуализировать метастазы, с пастер пипеткой, передать вводили эмбрион зебры в стеклянное дно полистирола блюдо и удалить избыток воды яйцо. Изображение всего тела эмбриона с конфокальным микроскопом установлен на низкое увеличение, чтобы получить общую картину распространения опухолевых клеток.
Используйте 488 нанометровый лазер для визуализации сосудов эмбриона зебры и лазер 543 нанометров для визуализации имплантированных опухолевых клеток, помеченных красным флуоресцентным маркером. Затем сканируйте эмбрион в восемь-десять шагов, чтобы получить высококачественное изображение.
