Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
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Gli xenografti embrionale Zebrafish sono utili per studiare l'invasione delle cellule tumorali. Preparare modelli di xenoinnesto iniettando cellule tumorali metastatiche etichettate fluorescentmente e cellule non cancerose nello spazio perivitellino di due embrioni transgenici. Lo spazio perivitellino è uno spazio tra l'embrione periderm e il sacco vitellino. Lascia crescere gli embrioni per il periodo desiderato.
Durante questo periodo, le cellule tumorali metastatiche si dividono aggressivamente nel sito di iniezione mentre le cellule non cancerose rimangono stabili. Dopo l'incubazione, utilizzare una pipetta pasteur per trasferire gli embrioni in un piatto di sospensione con fondo di vetro. Rimuovere l'acqua in eccesso delle uova e posizionare gli embrioni nella posizione desiderata per l'imaging. Tenere un foglietto di copertura sopra il piatto e posizionare il piatto sotto un microscopio a campo luminoso.
Acquisire immagini e analizzare il comportamento invasivo di entrambi i tipi di cellule. Le cellule tumorali metastatiche tendono ad invadere i vasi sanguigni dal sito di iniezione. Si muovono lungo la circolazione, e poi invadono il tessuto circostante per proliferare. Al contrario, le cellule non cancerose rimangono nel sito di iniezione. Nel protocollo di esempio, inietteremo cellule tumorali al seno nello spazio perivitellino e nel condotto di Cuvier nei modelli di xenograft zebrafish per studiare la metastasi.
Per visualizzare la metastasi, con una pipetta pasteur, trasferire l'embrione zebrafish iniettato su un piatto di polistirolo con fondo di vetro e rimuovere l'acqua in eccesso delle uova. Immagine di tutto il corpo dell'embrione con un microscopio confocale impostato su un basso ingrandimento per ottenere un modello generale di diffusione delle cellule tumorali.
Usa un laser da 488 nanometri per visualizzare la vascucolatura dell'embrione zebrafish e un laser da 543 nanometri per visualizzare le cellule tumorali impiantate etichettate con marcatore fluorescente rosso. Quindi, scansiona l'embrione in otto o dieci passaggi per acquisire un'immagine di alta qualità.
