Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
קסנוגרפטים של עוברי זברה שימושיים בחקר פלישת תאים סרטנים. הכינו מודלים של קסנוגרפט על ידי הזרקת תאים סרטניים גרורתיים עם תווית פלואורסצנטית ותאים לא סרטניים לחלל הפריוויטליין של שני עוברים מהונדסים. המרחב הצמיגי הוא רווח בין העובר פרידרם לבין שק החלמון. תן לעוברים לגדול לתקופה הרצויה.
במהלך תקופה זו, תאים סרטניים גרורתיים מתחלקים באגרסיביות באתר ההזרקה בעוד תאים שאינם סרטניים נשארים יציבים. לאחר הדגירה, השתמש פיפטה פסטר להעביר עוברים לתוך צלחת השעיה תחתית זכוכית. הסר מים ביצה עודף למקם עוברים בתנוחה הרצויה להדמיה. שמור על כיסוי להחליק על גבי המנה ומניחים את המנה תחת מיקרוסקופ שדה בהיר.
לכוד תמונות ונתח את ההתנהגות הפולשנית של שני סוגי התאים. תאים סרטניים גרורתיים נוטים לפלוש לכלי הדם מאתר ההזרקה. הם נעים לאורך זרימת הדם, ואז פולשים לרקמה שמסביב כדי להתרבות. לעומת זאת, התאים הלא סרטניים נשארים באתר ההזרקה. בפרוטוקול לדוגמה, נזריק תאים סרטניים בשד לחלל perivitelline ואת הצינור של קובייה במודלים קסנוגרפט זברה דג ללמוד גרורות.
כדי לדמיין גרורות, עם פיפטה פסטר, להעביר את העובר זברה מוזרק לצלחת פוליסטירן תחתית זכוכית ולהסיר מים ביצה עודף. תמונה כל הגוף של העובר עם מיקרוסקופ confocal מוגדר הגדלה נמוכה כדי לקבל דפוס כללי של הפצת תאים סרטניים.
השתמש לייזר 488 ננומטר כדי לדמיין את כלי הדם עובר זברה דג לייזר 543 ננומטר לדמיין תאים סרטניים מושתלים שכותרתו עם סמן פלואורסצנטי אדום. לאחר מכן, לסרוק את העובר בשמונה עד עשרה שלבים כדי לרכוש תמונה באיכות גבוהה.
