Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
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Los xenoinjertos de embriones de pez cebra son útiles para estudiar la invasión de células cancerosas. Prepare modelos de xenoinjerto inyectando células de cáncer metastásico etiquetadas fluorescentemente y células no cancerosas en el espacio perivitellina de dos embriones transgénicos. El espacio perivitellina es un espacio entre el periderm embrionario y el saco de yema. Deje que los embriones crezcan durante el período deseado.
Durante este período, las células de cáncer metastásico se dividen agresivamente en el lugar de la inyección, mientras que las células no cancerosas permanecen estables. Después de la incubación, use una pipeta pasteur para transferir embriones a un plato de suspensión de fondo de vidrio. Retire el exceso de agua de huevo y coloque los embriones en la posición deseada para la toma de imágenes. Mantenga un resbalón de cubierta en la parte superior del plato y coloque el plato bajo un microscopio de campo brillante.
Capture imágenes y analice el comportamiento invasivo de ambos tipos de células. Las células cancerosas metastásicas tienden a invadir los vasos sanguíneos del lugar de la inyección. Se mueven a lo largo de la circulación, y luego invaden en el tejido circundante para proliferar. Por el contrario, las células no cancerosas permanecen en el lugar de la inyección. En el protocolo de ejemplo, inyectaremos células de cáncer de mama en el espacio perivitelline y conducto de Cuvier en modelos xenoinjertos de pez cebra para estudiar metástasis.
Para visualizar la metástasis, con una pipeta pasteur, transfiera el embrión de pez cebra inyectado a un plato de poliestireno de fondo de vidrio y elimine el exceso de agua de huevo. Imagen de todo el cuerpo del embrión con un microscopio confocal ajustado a bajo aumento para obtener un patrón general de diseminación celular tumoral.
Utilice un láser de 488 nanómetros para visualizar la vasculatura del embrión de pez cebra y un láser de 543 nanómetros para visualizar las células tumorales implantadas etiquetadas con marcador fluorescente rojo. A continuación, escanea el embrión en ocho a diez pasos para adquirir una imagen de alta calidad.
