zPDX-invazivliğin Analizi: Zebra Balığı Embriyo Ksenograftlarında Metastatik Kanser Hücrelerinin invaziv Davranışının Araştırılması

Zebra balığı embriyo ksinograftları kanser hücre invazyonunda faydalıdır. floresan etiketli metastatik kanser hücrelerini ve kanserli olmayan hücreleri iki transgenik embriyonun perivitelline uzayına enjekte ederek ksenograft modelleri hazırlayın. Perivitelline uzayı embriyo periderm ve yumurta sarısı kesesi arasındaki bir boşluktır. Embriyoların istenen süre boyunca büyümesine izin verin.

Bu dönemde, metastatik kanser hücreleri enjeksiyon bölgesinde agresif bir şekilde bölünürken, kanserli olmayan hücreler sabit kalır. Kuluçkadan sonra, embriyoları cam bir alt süspansiyon kabına aktarmak için bir pastör pipet kullanın. Fazla yumurta suyunu çıkarın ve embriyoları görüntüleme için istenen konuma getirin. Kabın üzerine bir kapak kayması tutun ve kabı parlak bir alan mikroskobu altına yerleştirin.

Görüntüleri yakalayın ve her iki hücre türünün istilacı davranışını analiz edin. Metastatik kanser hücreleri enjeksiyon bölgesinden kan damarlarını istila etme eğilimindedir. Dolaşım boyunca hareket ederler ve çoğalmak için çevredeki dokuya istila ederler. Buna karşılık, kanserli olmayan hücreler enjeksiyon yerinde kalır. Örnek protokolde metastaz çalışması için zebra balığı ksinograft modellerinde Cuvier'in perivitelline alanına ve kanalına meme kanseri hücrelerini enjekte edeceğiz.

Metastazı görselleştirmek için, pastör pipetle, enjekte edilen zebra balığı embriyosunu cam alt polistiren kabına aktarın ve fazla yumurta suyunu çıkarın. Tümör hücre yayılımının genel bir desenini elde etmek için embriyonun tüm vücudunu düşük büyütmeye ayarlanmış bir konfokal mikroskopla görüntüleyin.

Zebra balığı embriyo vaskülatını görselleştirmek için 488 nanometre lazer ve kırmızı floresan işaretleyici ile etiketlenmiş implante tümör hücrelerini görselleştirmek için 543 nanometre lazer kullanın. Daha sonra, yüksek kaliteli bir görüntü elde etmek için embriyoyu sekiz ila on adımda tarayın.