zPDX-Analyse der Invasivität: Untersuchung des invasiven Verhaltens metastasierender Krebszellen in Zebrafisch-Embryo-Xenografts

Zebrafisch-Embryo-Xenografts sind nützlich bei der Untersuchung der Krebszellinvasion. Bereiten Sie Xenograft-Modelle vor, indem Sie fluoreszierend markierte metastasierende Krebszellen und nicht-kanzeröse Zellen in den Perivitelline-Raum zweier transgener Embryonen injizieren. Der Perivitelline-Raum ist ein Raum zwischen embryo periderm und dem Dottersack. Lassen Sie Embryonen für den gewünschten Zeitraum wachsen.

Während dieser Zeit teilen sich metastasierende Krebszellen aggressiv in der Injektionsstelle, während nicht-kanzeröse Zellen stabil bleiben. Nach der Inkubation verwenden Sie eine Pasteurpipette, um Embryonen in eine Glasbodensuspensionsschale zu übertragen. Entfernen Sie überschüssiges Eiwasser und positionieren Sie Embryonen in der gewünschten Position für die Bildgebung. Halten Sie einen Deckel-Schlupf auf der Oberseite der Schale und legen Sie die Schale unter einem hellen Feldmikroskop.

Erfassen Sie Bilder und analysieren Sie das invasive Verhalten beider Zelltypen. Metastasierende Krebszellen neigen dazu, in die Blutgefäße von der Injektionsstelle einzudringen. Sie bewegen sich entlang der Zirkulation und dringen dann in das umgebende Gewebe ein, um sich zu vermehren. Im Gegensatz dazu bleiben die nicht-kanzerösen Zellen an der Injektionsstelle. Im Beispielprotokoll werden wir Brustkrebszellen in den Perivitellineraum und Kanal von Cuvier in Zebrafisch-Xenograft-Modelle injizieren, um Metastasen zu untersuchen.

Um Metastasen mit einer Pasteurpipette zu visualisieren, übertragen Sie den injizierten Zebrafisch-Embryo auf eine Glasboden-Polystyrolschale und entfernen Sie überschüssiges Eiwasser. Stellen Sie den ganzen Körper des Embryos mit einem konfokalen Mikroskop auf niedrige Vergrößerung eingestellt, um ein allgemeines Muster der Tumorzellverbreitung zu erhalten.

Verwenden Sie einen 488-Nanometer-Laser, um die Zebrafisch-Embryo-Vaskulatur zu visualisieren, und einen 543-Nanometer-Laser, um implantierte Tumorzellen zu visualisieren, die mit rotem Fluoreszenzmarker gekennzeichnet sind. Als nächstes scannen Sie den Embryo in acht bis zehn Schritten, um ein qualitativ hochwertiges Bild zu erhalten.