I denne video fremhæver vi en dissektion af den voksne Drosophila tarm og indsamling af midguts egnet til enkeltcelle dissociation og FACS for at isolere tarmstamceller.
Protocol
Denne protokol er et uddrag fra Tauc et al.,isolere tarm stamceller fra voksne Drosophila Midguts af FACS at studere stamcelle adfærd under aldring, J. Vis. Exp. (2014). BEMÆRK: Hvis denne protokol første gang bruges til at isolere ISC’er ved FAC-sortering, er følgende kontrolelementer obligatoriske for i første omgang at indstille FACS-parametrene korrekt: Dissocierede celler fra vild type (f.eks. w1118</…
Materials
Forceps: Dumont, Inox Biologie #5
Fine Science Tools
11252-20
SefarNitex 03-150um/38 (35 µm nylon mesh)
Sefar
3A03-0150-102-00
Falcon 5 ml Round Bottom Polystyrene Test Tube with Cell Strainer Snap Cap
Corning
352235
Polymax 1040
Heidolph
543-42210-00
Albumin from bovine serum (BSA)
Sigma
A4503-50G
0.5% Trypsin-EDTA
Invitrogen
15400-054
Trypsin obtained from a different company most likely has a different activity and the duration of the trypsin digest has to be adjusted accordingly.
SYTOX Blue Dead Cell Stain for flow cytometry
Life Technologies
S34857
RNAlater Stabilization Solution
Life Technologies
AM7023
Other solutions, e.g., Trizol can be used for subsequent RNA isolation