Dissectie van de Midgut van een volwassen vlieg: een methode voor het isoleren van het spijsverteringskanaal
Published: April 30, 2023
Abstract
Bron: Tauc, H.M., et al. Isolating Intestinal Stem Cells from Adult Drosophila Midguts by FACS to Study Stem Cell Behavior During Aging. J.Vis. Exp. (2014).
In deze video belichten we een dissectie van de volwassen Drosophila-darm en het verzamelen van midguts die geschikt zijn voor eencellige dissociatie en FACS om darmstamcellen te isoleren.
Protocol
Dit protocol is een uittreksel uit Tauc et al., Isolating Intestinal Stem Cells from Adult Drosophila Midguts by FACS to Study Stem Cell Behavior During Aging, J. Vis. Exp. (2014). OPMERKING: Als dit protocol voor het eerst wordt gebruikt om ISC’s te isoleren door FAC-sortering, zijn de volgende besturingselementen verplicht om de FACS-parameters in eerste instantie correct in te stellen: Gedissocieerde cellen van wild …
Materials
| Forceps: Dumont, Inox Biologie #5 | Fine Science Tools | 11252-20 | |
| SefarNitex 03-150um/38 (35 µm nylon mesh) | Sefar | 3A03-0150-102-00 | |
| Falcon 5 ml Round Bottom Polystyrene Test Tube with Cell Strainer Snap Cap | Corning | 352235 | |
| Polymax 1040 | Heidolph | 543-42210-00 | |
| Albumin from bovine serum (BSA) | Sigma | A4503-50G | |
| 0.5% Trypsin-EDTA | Invitrogen | 15400-054 | Trypsin obtained from a different company most likely has a different activity and the duration of the trypsin digest has to be adjusted accordingly. |
| SYTOX Blue Dead Cell Stain for flow cytometry | Life Technologies | S34857 | |
| RNAlater Stabilization Solution | Life Technologies | AM7023 | Other solutions, e.g., Trizol can be used for subsequent RNA isolation |
| FACSAria II cell sorter | Becton Dickinson | Turn on one hour prior to sorting |
Cite This Article
Dissection of the Midgut from an Adult Fly: A Method for Isolating the Digestive Tract. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20150, doi: (2023).