في هذا الفيديو، ونحن تسليط الضوء على تشريح الأمعاء Drosophila الكبار وجمع midguts مناسبة لتفكك خلية واحدة وFACS من أجل عزل الخلايا الجذعية المعوية.
Protocol
هذا البروتوكول هو مقتطف من Tauc وآخرون., عزل الخلايا الجذعية المعوية من الكبار Drosophila Midguts من قبل FACS لدراسة سلوك الخلايا الجذعية أثناء الشيخوخة, J. Vis. Exp. (2014). ملاحظة: إذا تم استخدام هذا البروتوكول لأول مرة لعزل ISCs عن طريق فرز FAC ، فإن عناصر التحك…
Materials
Forceps: Dumont, Inox Biologie #5
Fine Science Tools
11252-20
SefarNitex 03-150um/38 (35 µm nylon mesh)
Sefar
3A03-0150-102-00
Falcon 5 ml Round Bottom Polystyrene Test Tube with Cell Strainer Snap Cap
Corning
352235
Polymax 1040
Heidolph
543-42210-00
Albumin from bovine serum (BSA)
Sigma
A4503-50G
0.5% Trypsin-EDTA
Invitrogen
15400-054
Trypsin obtained from a different company most likely has a different activity and the duration of the trypsin digest has to be adjusted accordingly.
SYTOX Blue Dead Cell Stain for flow cytometry
Life Technologies
S34857
RNAlater Stabilization Solution
Life Technologies
AM7023
Other solutions, e.g., Trizol can be used for subsequent RNA isolation