تشريح الأمعاء الوسطى من ذبابة بالغة: طريقة لعزل الجهاز الهضمي

Abstract

المصدر: Tauc ، H. M. ، et al. عزل الخلايا الجذعية المعوية من ذبابة الفاكهة البالغة في الأمعاء الوسطى بواسطة FACS لدراسة سلوك الخلايا الجذعية أثناء الشيخوخة. J. Vis. Exp. (2014).

في هذا الفيديو ، نسلط الضوء على تشريح أمعاء ذبابة الفاكهة البالغة ومجموعة من الأمعاء الوسطى المناسبة للتفكك أحادي الخلية و FACS من أجل عزل الخلايا الجذعية المعوية.

Protocol

هذا البروتوكول هو مقتطف من Tauc et al. ، عزل الخلايا الجذعية المعوية من ذبابة الفاكهة البالغة في الأمعاء الوسطى بواسطة FACS لدراسة سلوك الخلايا الجذعية أثناء الشيخوخة ، J. Vis. Exp. (2014).

< class strong = "note" >ملاحظة: إذا تم استخدام هذا البروتوكول لأول مرة لعزل ISCs عن طريق فرز FAC ، فإن عناصر التحكم التالية إلزامية من أجل تعيين معلمات FACS بشكل صحيح في البداية: الخلايا المنفصلة من النوع البري (على سبيل المثال ^{w 1118}) ذبابة الفاكهة في منتصف الأحشاء بدون Sytox. الخلايا المنفصلة من النوع البري (على سبيل المثال w¹¹¹⁸) ذبابة الفاك....

Materials

<جدول fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="دائما"> List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments الملقط: دومون ، إينوكس بيولوجي # 5 أدوات العلوم الدقيقة 11252-20 SefarNitex 03-150um / 38 (شبكة نايلون 35 ميكرومتر) سيفر 3A03-0150-102-00 فالكون 5 مل أنبوب اختبار البوليسترين القاع المستدير مع غطاء مصفاة الخلية كورنينج 352235 بولي ماكس 1040 هايدولف 543-42210-00 الألبومين من مصل الأبقار (BSA) سيغما أ 4503-50 جرام 0.5٪ تريبسين EDTA إنفيتروجين 15400-054 من المرجح أن يكون للتربسين الذي تم الحصول عليه من شركة مختلفة نشاط
مختلف ويجب تعديل مدة ملخص التربسين وفقا لذلك. SYTOX Blue Dead Cell Stain لقياس التدفق الخلوي تقنيات الحياة S34857 حل تثبيت RNAlater تقنيات الحياة AM7023 يمكن استخدام حلول أخرى ، على سبيل المثال ، Trizol لعزل الحمض النووي الريبي اللاحق فارز الخلايا FACSAria II بيكتون ديكنسون قم بتشغيله قبل ساعة واحدة من الفرز