I denne videoen fremhever vi en disseksjon av den voksne Drosophila-tarmen og samlingen av midguts egnet for encellet dissosiasjon og FACS for å isolere tarmstammeceller.
Protocol
Denne protokollen er et utdrag fra Tauc et al.,Isolere tarmstammeceller fra voksen drosophila midguts av FACS for å studere stamcelleadferd under aldring, J. Vis. Exp. (2014). MERK: Hvis denne protokollen brukes for første gang til å isolere ISCer ved hjelp av FAC-sortering, er følgende kontroller obligatoriske for først å angi FACS-parameterne riktig: Dissosierte celler fra villtype (f.eks. w1118</…
Materials
Forceps: Dumont, Inox Biologie #5
Fine Science Tools
11252-20
SefarNitex 03-150um/38 (35 µm nylon mesh)
Sefar
3A03-0150-102-00
Falcon 5 ml Round Bottom Polystyrene Test Tube with Cell Strainer Snap Cap
Corning
352235
Polymax 1040
Heidolph
543-42210-00
Albumin from bovine serum (BSA)
Sigma
A4503-50G
0.5% Trypsin-EDTA
Invitrogen
15400-054
Trypsin obtained from a different company most likely has a different activity and the duration of the trypsin digest has to be adjusted accordingly.
SYTOX Blue Dead Cell Stain for flow cytometry
Life Technologies
S34857
RNAlater Stabilization Solution
Life Technologies
AM7023
Other solutions, e.g., Trizol can be used for subsequent RNA isolation