효소 소화 및 수동 해리: 세포 배양을 위한 C. 예르간 배아를 준비하는 방법

- 중력성 벌레를 표백하여 분리된 펠릿 알로 시작하십시오. 이 절차의 각 단계는 배양 된 세포의 오염을 피하기 위해 멸균적으로 수행되도록하십시오.

적절한 소화 기간 후, 계란을 부드럽게 원심분리하고 소화를 멈추기 위해 18게이지 바늘을 통해 배아를 통과하여 개별 세포를 기계적으로 분리합니다.

실시예 프로토콜에서, 우리는 체외 형태학적 분화 및 분석을 위한 배아 세포를 준비할 것입니다.

- 세균 오염을 도입하지 않도록 라미나르 플로우 후드 아래에서 작업하는 동안, 펠렛 달걀을 밀리리터 치티나아제 당 2밀리리터로 1밀리리터로 재페판하고 신선한 15밀리리터 원뿔튜브로 옮기십시오.

상체를 조심스럽게 제거한 후, L15 배지의 3밀리리터를 첨가합니다. 계란을 6센티미터 직경 플레이트로 옮기고 18게이지 바늘로 10밀리리터 멸균 주사기를 사용하여 수동 해리를 시작합니다.

세포 덩어리를 제거하려면 소화되지 않은 계란, 부화 유충은 5-미크론 필터를 통해 서스펜션을 부드럽게 걸러내고 필터를 통해 L15 배지의 4~5밀리리터를 추가로 실행하여 세포를 회수합니다.