Unidades de Formação de Colônias de Contagem (CFUs): Quantificação de Bactérias de Corpos voadores
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Koyle, M. L., et al. Rearando a Mosca de Frutas & Drosophila melanogaster sob Condições Axenic e Gnotobióticas. J. Vis. Exp. (2016).
A microbiota de drosophila impacta o desenvolvimento, imunidade e fisiologia do animal. Este vídeo descreve um método para quantificar bactérias de moscas, determinando a colônia formando unidades a partir de preparações corporais inteiras. O protocolo em destaque demonstra a técnica com moscas, criadas sob condições gnóbiticas usando quatro espécies bacterianas.
Protocol
Este protocolo é um trecho de Koyle et al., Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobitic Conditions, J. Vis. Exp. (2016). 1. Ovos descolados e transferência para dieta estéril Prepare o armário de biossegurança pulverizando o interior (incluindo os lados) com 70% de etanol. Limpe o fundo com um tecido de laboratório e esterilize o capô com luz UV por ~15 min. Esterilize todos os suprimentos não biológicos (copos de esp?…
Representative Results
Arquivo de código suplementar: Cálculos amostrais. Clique aqui para ver este arquivo (clique com o botão direito do mouse para baixar).
Materials
| Brewer's Yeast | MP Biomedicals, LLC. | 903312 | |
| Glucose | Sigma Aldrich | 158968-3KG | |
| Agar | Fisher–Lab Scientific | fly802010 | |
| Welch's 100% Grape Juice Concentrate | Walmart or other grocery store | 9116196 | |
| Cage: 32 oz. Translucent Round Deli Container | Webstaurant Store | 999L5032Y | |
| Translucent Round Deli Container Lid | Webstaurant Store | 999YNL500 | |
| Stock Bottles | Genesee Scientific | 32-130 | |
| Droso-Plugs | Genesee Scientific | 49-101 | |
| Nylon Mesh | Genesee Scientific | 57-102 | |
| Plastic Bushing | Home Depot | 100404002 | |
| Plastic Bushing Cap | Home Depot | 100153897 | |
| Specimen Cup | MedSupply Partners | K01-207067 | |
| Repeater M4 | Eppendorf | 4982000322 | |
| 50 ml Centrifuge Tubes | TrueLine Centrifuge Tubes | TR2003 | |
| Food Boxes | USA Scientific | 2316-5001 | |
| Lysing Matrix D Bulk | MP Biomedicals, LLC. | 116540434 | |
| Filter Pipette Tips, 300 µl | USA Scientific | 1120-9810 | |
| Petri Dishes | Laboratory Product Sales | M089303 | |
| Ethanol | Decon Laboratories, INC. | 2701 | |
| Paintbrush | Walmart | 5133 | |
| Forceps | Fisher | 08-882 | |
| Household Bleach (6-8% Hypochlorite) | Walmart | 550646751 | |
| Universal Peptone | Genesee Scientific | 20-260 | |
| Yeast Extract | Fisher Scientific | BP1422-500 | |
| Dipotassium Phosphate | Sigma Aldrich | P3786-1KG | |
| Ammonium Citrate | Sigma Aldrich | 25102-500g | |
| Sodium Acetate | VWR | 97061-994 | |
| Magnesium Sulfate | Fisher Scientific | M63-500 | |
| Manganese Sulfate | Sigma Aldrich | 10034-96-5 | |
| MRS Powder | Sigma Aldrich | 69966-500G | |
| 96 Well Plate Reader | BioTek (Epoch) | NA | |
| 1.7 ml Centrifuge Tubes | USA Scientific | 1615-5500 | |
| Filter Pipette Tips, 1,000 µl | USA Scientific | 1122-1830 | |
| 96 Well Plates | Greiner Bio-One | 655101 | |
| Ceramic Beads | MP Biomedicals, LLC. | 6540-434 | |
| Tissue Homogenizer | MP Biomedicals, LLC. | 116004500 | |
| Class 1 BioSafety Cabinet | Thermo Scientific | Model 1395 |
Cite This Article
Counting Colony Forming Units (CFUs): Quantifying Bacteria from Fly Bodies. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20120, doi: (2023).