线虫的冷冻裂解：一种暴露内部蠕虫组织进行染色的方法

- 将用液体清洗的C. elegan 转移到以前涂有聚氨酯的玻璃滑梯上， 一种化合物，将帮助蠕虫角质层粘在玻璃表面。 轻轻按压另一个玻璃滑梯直下，边缘悬垂在底部滑梯上。要使蠕虫固定而不损坏，压缩动物，避免任何横向运动。然后，将装有夹层蠕虫的玻璃滑梯放在装有冷冻剂（如液氮或干冰）的绝缘实验室容器内的金属块上。

金属是一种有效的温度导体，确保块表面足够冷，可以快速将蠕虫的角质层冻结到两个玻璃表面。 冷冻后，迅速分离玻璃滑梯以拆开或裂开蠕虫角质层。 继续组织固定和染色，因为低渗透性角质层的破坏允许化学固定剂和染色抗体进入内部蠕虫组织。 在下列协议中，我们将看到冷冻开裂技术和组织固定的详细演示。

- 首先，准备一张幻灯片来修复蠕虫。派珀特 30微升的聚L-赖氨酸到幻灯片上，然后，将第二张幻灯片设置到另一个幻灯片上，并将它们揉在一起，均匀地将溶液分散到两者上。 现在，将两张幻灯片剥离出来，让它们干燥30分钟。 

接下来，将一个扁平的金属块放入装满液氮的容器中。用M9溶液清洗板，并转移约10微升的M9含有蠕虫。或者，选择蠕虫，并将M9添加到幻灯片中。

一旦蠕虫被转移，轻轻地将盖唇横穿于它们身上，使盖唇悬在一边。然后，轻轻按下盖子，而不会做出任何横向运动。

现在，立即将滑梯转移到液氮中的金属块，让它冻结。 五分钟后，使用悬垂的边缘轻拂盖片。迅速这样做，以获得皮质层的正确裂纹。

接下来，在零下20摄氏度的温度下将幻灯片浸入甲醇填充的玻璃科普林罐中。5分钟后，将幻灯片转移到充满乙酮的玻璃科普林罐中，在相同的温度下再放5分钟。幻灯片可以直接染色或储存在零下20摄氏度。