線虫の凍結割れ:染色のための内性虫組織を暴露する方法

-ポリリジンでコーティングされたガラススライドに液体で洗浄されたC.eレガンを移し、 虫のキューティスルがガラス面にくっつくのを助ける化合物。下のスライドに端を張り出して別のガラススライドをまっすぐに押し下げる。虫を損傷せずに固定するには、横方向の動きを避けて動物を圧縮する。次に、液体窒素やドライアイスなどの凍結剤で満たされた絶縁された実験室容器内の金属ブロックにサンドイッチワームでガラススライドを置く。

金属は、ブロック表面が両方のガラス表面にワームのキューティスを急速に凍結するのに十分な寒さを保証する有効な温度導体です。凍結したら、ガラススライドを素早く分離してワームキューティクルを引き離すか、開き裂く。低透膜の破壊により、化学固定剤や染色抗体が内部ワーム組織にアクセスできるように、組織固定と染色を進めます。

- まず、ワームを固定するためのスライドを準備します。ピペット30マイクロリットルのポリL-リジンをスライドに、もう一方のスライドに2番目のスライドを設定し、両方に溶液を均等に広げるためにそれらを一緒にこすります。 

次に、液体窒素を充填した容器に平らな金属ブロックを入れ、M9溶液でプレートを洗い、ワームを含むM9の約10マイクロリットルを移します。

ワームが移り替わったら、カバースリップが1つの端に突き出るようにカバースリップのクロスウェイをそっと落とします。

さて、すぐに液体窒素で金属ブロックにスライドを移し、凍結させます。5分後、張り出した端を使ってカバースリップをフリックします。

次に、メタノールで満たされたガラスのコプリン瓶をマイナス20度で浸します。5分後、同じ温度でさらに5分間、スライドをアセトンで満たされたガラスのコプリン瓶に移します。