Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Передача промывают С. elegans в жидкости на стеклянную горку, ранее покрытую поли-лизином, соединением, которое поможет червю кутикулы прилипнуть к стеклянной поверхности. Аккуратно нажмите другой стеклянный слайд прямо вниз с краем, нависающими над нижней горкой. Чтобы обездвижить червей без повреждений, сжать животных, избегая каких-либо боковой движения. Затем поместите стеклянные горки с зажатыми червями на металлический блок внутри изолированного лабораторного контейнера, наполненного
Металл является эффективным проводником температуры обеспечения поверхности блока достаточно холодно, чтобы быстро заморозить кутикулы червя на обе стеклянные поверхности. После замораживания, быстро отделить стеклянные слайды, чтобы тянуть друг от друга или трещины открыть червь кутикулы. Продолжить с фиксацией тканейи окрашивания, как нарушение низкой проницаемости кутикулы позволяет химических фиксаторов и окрашивания антител для доступа к внутренней ткани червя.
- Во-первых, подготовить слайд, чтобы исправить червей. Pipette 30 микролитров поли-L-лизина на слайде,nd затем, установить второй слайд на другой и протереть их вместе, чтобы распространить раствор равномерно на обоих. Теперь, очистить друг от друга два слайда идайте им высохнуть в течение 30 минут.
Далее поместите плоский металлический блок в контейнер, наполненный жидким азотом. Вымойте пластины раствором M9 и перенесите около 10 микролитров M9, содержащих червей.
После того, как черви передаются, осторожно падение coverslip перекрестки на них так, что coverslip свесы один край. Затем, осторожно нажмите крышку, не делая каких-либо боковой движений.
Теперь немедленно перенесите слайд на металлический блок в жидком азоте и дайте ему замерзнуть. Через пять минут смяйте крышку с помощью нависающей кромки. Сделайте это быстро, чтобы получить правильную трещину кутикулы.
Далее погрузите горку в заполненную метаноломстеклянную банку Coplin при температуре минус 20 градусов по Цельсию. Через пять минут перенесите слайд в заполненную ацетоном стеклянную банку Coplin еще на пять минут при той же температуре.
